一、服務(wù)簡介
細(xì)胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進(jìn)行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標(biāo)記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細(xì)胞凋亡的原理。
二、技術(shù)流程
1、TUNEL-熒光顯色：
基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上熒光素 (如FITC) 標(biāo)記的dUTP(fluorescein-dUTP)，從而通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行凋亡檢測。
2、 TUNEL-DAB顯色：
基因組DNA斷裂時，暴露的3'-OH在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標(biāo)記的dUTP(Biotin-dUTP)，隨后和辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的Streptavidin (Streptavidin-HRP)結(jié)合，最后在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細(xì)胞，從而通過普通光學(xué)顯微鏡檢測到凋亡的細(xì)胞 。
三、服務(wù)說明 1、待測組織樣本石蠟切片，常溫運(yùn)輸；冰凍切片，干冰運(yùn)輸；如需我司切片，則石蠟切片及冰凍切片需分別提供多聚甲醛固定的樣本4℃冰袋運(yùn)輸或新鮮樣本干冰運(yùn)輸。
2、準(zhǔn)備待測樣品制備組織切片或細(xì)胞爬片，并根據(jù)所選顯色檢測方法進(jìn)行TUNEL檢測凋亡
3、顯色結(jié)果拍片，分析并整理結(jié)果報告。
4. 實驗周期：1-2周；
5. 若另有疑問歡迎向本公司咨詢，我們將竭誠為您服務(wù)。
四、成果展示
五、詢價及訂購
感謝您選擇我公司的Tunnel檢測細(xì)胞凋亡服務(wù)。如有相關(guān)問題請聯(lián)系我們的工作人員。